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蛋白质的检测方法
日期：2024-11-25 12:49
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摘要：
（）蛋白质的盐析
取1.5mL蛋白质溶液，加入等体积饱和硫酸铵溶液（浓度为50%饱和），微微摇动试管，使溶液混合均匀后，静置数分钟，球蛋白即析出呈絮状沉淀（如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵），用滤纸滤取上清液，滤液中再加入固体硫酸铵粉末至不再溶解，析出的即为清蛋白，再加水稀释，观察沉淀是否溶解。
（）蛋白质的沉淀
1．用重金属盐沉淀蛋白质
取三支试管，各加1mL蛋白质溶液，分别各加3滴6%醋酸铅溶液、3滴2%硫酸铜溶液和3滴1%硝酸银溶液，观察蛋白质沉淀的析出。
2．用有机酸沉淀蛋白质
取支试管，各加1mL蛋白质溶液，并加5%醋酸溶液使之呈酸性（该沉淀反应好在弱酸中进行）。然后分别滴加饱和苦味酸、饱鞣酸溶液，直至沉淀产生为止。
用10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液进行类似实验（用量同前），观察现象。
（三）蛋白质的颜色反应
1．黄蛋白反应
于试管中，加1mL蛋白质溶液和10滴浓硝酸溶液，直火加热煮沸，观察溶液和沉淀颜色。冷却后，再加入20滴10%氢氯化钠溶液，观察颜色变化。
2．与茚三酮的反应
在支试管中，分别加1%赖氨酸溶液和1mL蛋白质溶液，分别加2滴茚三酮溶液，加热至沸，观察有什么现象？
3．与硝酸汞试剂作用——米伦反应
在支试管中，分别加1mL 0.5%苯酚溶液和1mL蛋白质溶液，再各加0.5mL米伦试剂（不可太多），苯酚溶液出现玫瑰红色，而蛋白质溶液加热后出现沉淀，加热凝固的蛋白质呈砖红色，有时溶液也呈红色。
4．蛋白质的双缩脲反应
(1) 双缩脲的生成
于干燥试管中，加0.2g～0.3g尿素，微火加热，尿素熔化并形成双缩脲，放出的氨可用红色石蕊试纸试验。试管内有白色固体出现后，停止加热。
(2) 双缩脲反应
上述产物冷却后，加1mL10%氢氧化钠溶液，摇匀，再加2滴2%硫酸酮溶液，混匀，观察有无紫色出现。
于试管中，加1mL清蛋白溶液和1mL10%氢氧化铜溶液，再加1滴～2滴2%硫酸铜溶液共热，由于蛋白质与硫酸铜生成络合物而呈紫色。取1%赖氨酸溶液作对照，观察颜色变化。
(四) 核蛋白组成的鉴定
1．核蛋白的水解
取20mL酵母核蛋白混悬液于离心管中离心分离，弃去清液，将沉淀转入小烧杯中，加15mL 5%硫酸，盖上表面皿在水浴上煮沸约1h（煮沸过程中保持原有体积），水解毕，离心分离，取上层清液作以下检查。
2．核糖的鉴定
于试管中，加1mL 20%间苯酚盐酸溶液，以小火加热至沸，迅速加入5滴水解液，呈现红色，（如红色不显可再稍加热）。
3．磷酸的鉴定
取10滴水解液，置于试管中，加5滴7%钼酸铵溶液和2滴浓硝酸溶液，小心于火上加热，即有黄色沉淀生成。
4．嘌呤与嘧啶的鉴定
取约4mL水解液，置于小烧杯中，加入氨水至微碱性，过滤，在滤液中加1mL 5%硝酸银铵溶液，静置片刻，即有絮状的嘌呤或嘧啶银盐沉淀生成。
取1.5mL蛋白质溶液，加入等体积饱和硫酸铵溶液（浓度为50%饱和），微微摇动试管，使溶液混合均匀后，静置数分钟，球蛋白即析出呈絮状沉淀（如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵），用滤纸滤取上清液，滤液中再加入固体硫酸铵粉末至不再溶解，析出的即为清蛋白，再加水稀释，观察沉淀是否溶解。
（）蛋白质的沉淀
1．用重金属盐沉淀蛋白质
取三支试管，各加1mL蛋白质溶液，分别各加3滴6%醋酸铅溶液、3滴2%硫酸铜溶液和3滴1%硝酸银溶液，观察蛋白质沉淀的析出。
2．用有机酸沉淀蛋白质
取支试管，各加1mL蛋白质溶液，并加5%醋酸溶液使之呈酸性（该沉淀反应好在弱酸中进行）。然后分别滴加饱和苦味酸、饱鞣酸溶液，直至沉淀产生为止。
用10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液进行类似实验（用量同前），观察现象。
（三）蛋白质的颜色反应
1．黄蛋白反应
于试管中，加1mL蛋白质溶液和10滴浓硝酸溶液，直火加热煮沸，观察溶液和沉淀颜色。冷却后，再加入20滴10%氢氯化钠溶液，观察颜色变化。
2．与茚三酮的反应
在支试管中，分别加1%赖氨酸溶液和1mL蛋白质溶液，分别加2滴茚三酮溶液，加热至沸，观察有什么现象？
3．与硝酸汞试剂作用——米伦反应
在支试管中，分别加1mL 0.5%苯酚溶液和1mL蛋白质溶液，再各加0.5mL米伦试剂（不可太多），苯酚溶液出现玫瑰红色，而蛋白质溶液加热后出现沉淀，加热凝固的蛋白质呈砖红色，有时溶液也呈红色。
4．蛋白质的双缩脲反应
(1) 双缩脲的生成
于干燥试管中，加0.2g～0.3g尿素，微火加热，尿素熔化并形成双缩脲，放出的氨可用红色石蕊试纸试验。试管内有白色固体出现后，停止加热。
(2) 双缩脲反应
上述产物冷却后，加1mL10%氢氧化钠溶液，摇匀，再加2滴2%硫酸酮溶液，混匀，观察有无紫色出现。
于试管中，加1mL清蛋白溶液和1mL10%氢氧化铜溶液，再加1滴～2滴2%硫酸铜溶液共热，由于蛋白质与硫酸铜生成络合物而呈紫色。取1%赖氨酸溶液作对照，观察颜色变化。
(四) 核蛋白组成的鉴定
1．核蛋白的水解
取20mL酵母核蛋白混悬液于离心管中离心分离，弃去清液，将沉淀转入小烧杯中，加15mL 5%硫酸，盖上表面皿在水浴上煮沸约1h（煮沸过程中保持原有体积），水解毕，离心分离，取上层清液作以下检查。
2．核糖的鉴定
于试管中，加1mL 20%间苯酚盐酸溶液，以小火加热至沸，迅速加入5滴水解液，呈现红色，（如红色不显可再稍加热）。
3．磷酸的鉴定
取10滴水解液，置于试管中，加5滴7%钼酸铵溶液和2滴浓硝酸溶液，小心于火上加热，即有黄色沉淀生成。
4．嘌呤与嘧啶的鉴定
取约4mL水解液，置于小烧杯中，加入氨水至微碱性，过滤，在滤液中加1mL 5%硝酸银铵溶液，静置片刻，即有絮状的嘌呤或嘧啶银盐沉淀生成。
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