荧光显微镜原理应用及使用

日期：2024-11-23 10:30

浏览次数：1573

摘要：

()荧光显微镜的原理和结构特点：荧光显微镜是利用个发光效率的点光源，经过滤色系统发出定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上些附件(如荧光光源、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。荧光光源——般采用超压汞灯(50200W)，它可发出各种波长的光，但每种荧光物质都有个产生强荧光的激发光波长，所以需加用激发滤片（般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片），仅使定波长的激发光透过照射到标本上，而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后，在短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专性，般都比激发光弱，为能观察到专的荧光，在物镜后面需加阻断(或压制)滤光片。它的作用有：是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛，是选择并让特异的荧光透过，表现出专的荧光色彩。两种滤光片必须选择配合使用。

荧光显微镜就其光路来分有两种：

1．透射式荧光显微镜: 激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上．这是比较旧式的荧光显微镜。其点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱．所以对观察较大的标本材料较好。

2．落射式荧光显微镜这是近代发展起来的新式荧光显微镜，与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。

（）荧光显微镜使用方法。

1．打开灯源，超压汞灯要预热几分钟才能达到亮点。

2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的插块。

3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。

4．放置标本片，调焦后即可观察。使用中应注意：末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜；压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。

(三)观察在示教台上的荧光显微镜下用蓝紫光滤光片，可见经o．01％的丫啶橙荧光染料染色的细胞，细胞核和细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光(暗绿色和橙红色)。

上海金鹏分析仪器有限公司 www.jp1718.com
电话：021-36162366 60959971 61425398
手机： 13764356938 18918199710 13585698333
QQ:842727501，964122960，765695826， 2460311703， 2431022418，170324176
传真：021-36162369
地址：上海市真陈路1398弄15号邮编：200444

下一篇：恒温恒湿试验箱的保养方法
上一篇：光泽度仪的分类及应用