浅谈层析实验中的气泡问题（二）

       说到气泡，你可能会联想到酣畅淋漓的可乐，通透上头的啤酒，亦或是流光飞舞的浪漫，生活中的气泡，似乎还带有那么一丝美好，然而对于实验来说，尤其是在大多不会配置在线脱气单元的FPLC系统上做的层析实验，气泡就如烦人的苍蝇，鞋里的石子，令人如鲠在喉不吐不快，如若是重要样品、昂贵填料，气泡带来的实验失败那简直是小型灾难现场。那么气泡是源自何来，而又去之何处，怎么能让它们从我们的系统里消失，以下此篇，做一个小小探讨，抛砖引玉，共谋对策而灭之。

Fig.1 气泡造成的UV杂峰

Fig.2 气泡造成的系统压力波动

这些症状基本能覆盖大部分的层析实验问题，可见气泡的破坏力和恼人程度，知己知彼方才能有的放矢，那么气泡是如何形成的呢？流动相中气体形成的原因有多种，*根本的还是由于气体在液体中达到过饱和状态；平衡状态时溶解空气的量与溶液的性质、气体的种类有关，也与外界条件有关, 主要的外界条件有以下 3 种。

● 层析仪的缓冲进口一般都有滤网设计，如果滤网维护清洁不到位，滤网杂质过多或者长菌造成液体通量不足，在较高的流速情况下，管路内部的压力急剧降低，此时气泡将会闪亮登场，带来波浪般的图谱波动；因此实验之前需要检查系统缓冲液进口滤头的清洁情况，如有杂质需立刻清洗去除。

Fig.3 缓冲液进口滤头筛网

● 配置缓冲液时的气压高（气温，湿度，天气和海拔都会影响大气压），瓶子拧紧后保存，如果实验时的气压有变化，在打开缓冲液进行实验时，就会带入析出的气泡，因此，预配置缓冲液的脱气就非常重要。
● 系统中的不同管径流路的转换，带来通量的改变，比如细管转粗管，在高流速情况下，由于通量的骤升，形成局部负压，容易引发气泡的析出或漏入，所以系统管径的使用要尽量避免细管转粗管，如果实验必须，则要注意避免使用高流速。
● 低压梯度时，由于低压梯度单元部位的压力略低于大气压，且混合室多装在泵后（高压侧），但实际混合在低压侧就开始了，所以，低压梯度比混合发生在泵后的高压梯度容易产生气泡。（常规单泵二或四通道的均为低压混合模式）
● 色谱柱中的压力一般较高，气体溶解度增大，一般在柱中不易产生气泡。然而，在接近柱的出口处，压力相对较低，柱体填料的进出口压差会很大，此时流动相里溶解的气泡由于压力差，极易在填料中析出，影响柱效，甚至损坏填料，因此系统里会配置反压装置（如背压阀），给柱后施加一定的反压，降低柱内压差，从而避免气泡的析出。

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