植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析：

一、目的

掌握植物基因组DNA提取的一般方法及注意事项。大分子量DNA分子的酶切分析。

二、原理

十六烷基三乙基溴化胺是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3

mol/L

NaCl)时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。

三、试剂与器材

（一）、试剂

1 、DNA extraction ：500ml

31.885g sorbitol (山梨醇)

6.05g tris PH8.2 (一般不调)

2、Nuclei lysis buffer: 500ml

100ml 1M Tris PH7.5

100ml 0.25M EDTA

200ml 5M NaCl

10g CTAB

100ml ddH2O

3、5% sarkosyl (N-月桂酰肌氨基钠盐) 500ml

用时，将上述三种溶液按1：1：0.4 比例混匀，加入亚硫酸氢钠（3.8g/l），65℃预热，既为抽提液。

（二）器材

恒温水浴、研钵、电泳设备

四、操作步骤

（一）、基因组DNA提取

1 取0.15g左右小麦叶片，在液氮中研磨后放入1.5ml离心管中，加入700ml抽体液（65℃预热）混匀，放入65℃水浴中，裂解40-60分钟，期间温和混匀几次。

2 取出裂解好的DNA ，加入700ml氯仿：异戊醇（24：1），猛烈混匀，离心（1000rpm，10分钟）。

3 取上清于新管中，（不要混入氯仿），加入0.8-1倍预冷异丙醇，缓慢混匀后，再猛烈混匀，使DNA成团，-20℃放半小时以上。

4 将析出的DNA 离心，14000rpm，10分钟。

5 去掉上清，将沉淀用1ml 70% 乙醇清洗一次，离心 干燥，溶于50ml ddH2O。

（二）、酶切及电泳分析

取四支1.5ml离心管，分别写上标记：g/EcoRⅠ（学号）、g/HindⅢ（学号）、λ/EcoRⅠ（学号）和λ/ Hind Ⅲ（学号）。

前两支试管加入30 ml基因组DNA。后两支试管加入3mlλ基因组DNA。

前两支加入5 ml 10×buffer。后两支加入2ml 10×buffer。

前两支分别加入ddH2O 12.5ml，后两支分别加入ddH2O 13ml

分别加入RNase 1 ml。

前两支试管分别加入1.5 ml EcoRⅠ和Hind Ⅲ，10000rpm离心20 S混匀。前两支试管分别加入1 ml EcoRⅠ和Hind

Ⅲ，10000rpm离心20 S混匀。

37℃反应4h

0.8%琼脂糖凝胶电泳（样品全部点样）。

观察记录并分析实验结果

以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析。

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