植物染色体DNA的抽取及浓度测定说明

 
、原理
植物组织中大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在起，以核蛋白的形式存在于细胞核内。CTAB：是种阳离子去污剂，
可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在盐溶剂中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶剂盐的浓度到定程度(0.3mol/L NaCl)
时从溶剂中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于盐溶剂中，
再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：
（1）DNA的结构和双链易受多种因素的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件。
（2）抑制内外源DNase的活力。DNase就象把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜，现可以通过多种途径来做到这点：a、
低温操作；b、调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA）除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。
（3）防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素，会使DNA降解，般综合考虑，取pH8.0左右为宜。
（4）防止物理因素降解。如温度太或机械张力剪切等，DNA分子特别大，其分子量可达1012道尔顿，易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急
些的流动也会使DNA断裂，所以在抽提过程中要特别注意这点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也不要剧烈摇动。
（5）植物的次生代谢物对核酸提取有干扰作用。因此，般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取DNA的材料，这是因幼嫩的新生组织
次生代谢物较少，DNA含量，且易于破碎，植物材料好是新鲜的。
分离提取植物DNA的方法很多，本实验采用CTAB法提取DNA并通过紫外吸收法和电泳鉴定。